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          羔羊大腸桿菌的藥敏試驗

          發布時間:2015-12-09 17:06    作者:牧通人才網    來源:    查看:
              1  材料

              (1)供試菌株的分離鑒定與培養。從豐寧縣樂拓牧業公司羊場因腹瀉死亡的羔羊中取1只進行試驗研究,取肝臟做細菌分離,接種于普通營養瓊脂平板,37℃培養24小時,挑取表面光滑、邊緣整齊、灰白色、半透明的小菌落, 接種于麥康凱瓊脂平板,37℃培養24小時, 再從麥康凱瓊脂平板上挑取孤立的紅色菌落。將分離的單個菌落涂片革蘭氏染色、鏡檢,觀察到兩端鈍圓的小桿菌,單個或成對排列,革蘭氏染色陰性。將分離的菌株進行生化試驗。結果見表1。
                        
              注:⊕發酵糖產酸產氣;+發酵糖產酸或實驗陽性;-不發酵糖或實驗陰性;⊕/ⅹ遲緩發酵糖類。由表1可知,所分離的5個菌株均為羊的大腸桿菌。將分離鑒定后確定為大腸桿菌的菌落無菌接種在營養肉湯中37℃培養24小時,用滅菌生理鹽水稀釋10倍,備用。

              (2)藥敏紙片。用6mm打孔器打出濾紙小圓片,160℃干熱滅菌1小時后按常規方法分別制備青霉素、鏈霉素、慶大霉素、環丙沙星和氟本尼考等藥敏紙片,備用。

              (3)中藥。從本地醫藥公司采購白頭翁、蒼術、白術、黃芪、茯苓、澤瀉、大青葉、苦參、青皮和陳皮。

             試驗方法

              (1)制備藥液。將上述中藥加適量水煎煮30分鐘后過濾,水煎2次,將2次過濾的藥液合并濃縮成含生藥1g/mL的藥液備用。

              (2)中藥藥敏試驗。采用平皿打洞法將供試藥液均勻涂布在瓊脂培養基表面,用直徑6mm打孔器在瓊脂平板上打孔(適當封閉孔底),將制備好的中藥供試液分別加入各孔內(滿而不溢),貼上標記,置37℃溫箱培養24小時。

              (3)抗菌藥敏試驗。將供試菌液均勻涂布于瓊脂培養基表面貼上標記,以無菌方法貼上各種藥敏實驗紙,置37℃恒溫箱培養24小時。

              (4)抑菌結果的判定。抑菌圈大于15mm以上為高度敏感,10~15mm為中度敏感,小于10mm為低度敏感,沒有抑菌圈為無效。

              3  試驗結果

              白頭翁對菌株呈高度敏感,黃芪呈中度敏感,其他中藥均呈低度敏感,苦參、大青葉對個別菌株無抑菌效果;慶大霉素、環丙沙星呈高度敏感,恩諾沙星中度敏感,氟苯尼考、磺胺嘧啶呈低度敏感,青霉素基本沒有抑菌作用。常用的抗生素對不同菌株間的抑菌效果具有一定的差異性,這種菌株差異比中藥明顯,說明在解決臨床耐藥菌株方面,中藥具有更好的效果,但是中草藥的敏感程度不如常用的抗生素藥物,需要進一步探討和研究兩者間如何合理有效地配合問題。

              (河北省豐寧滿族自治縣農牧局  李海燕、劉國文、葉和平)

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