山羊傳染性胸膜肺炎的診斷

    山羊傳染性胸膜肺炎是山羊特有的接觸性傳染病，以發(fā)熱、咳嗽，出現(xiàn)漿液性、纖維蛋白滲出性肺炎和胸膜炎為特征。病原為山羊支原體山羊肺炎亞種，是一種細(xì)小、多形性的微生物，平均大小為0.3~0.5um，革蘭氏染色陰性。專(zhuān)屬需氧菌，要有特別的培養(yǎng)基才能生長(zhǎng)。 雞胚卵黃或尿囊均適合于該菌生長(zhǎng)。

    1  病理學(xué)診斷

   （1）病理剖檢變化。病變多局限于胸部。胸腔常有淡黃色液體，有時(shí)多至500~2000mL，暴露于空氣后發(fā)生纖維蛋白凝結(jié)。急性病例的損害多為一側(cè)，間或兩側(cè)有纖維蛋白性肺炎。肺變區(qū)凸出于肺表，顏色由紅至灰不等，切面呈大理石樣。纖維蛋白滲出液的充盈使得肺小葉間組織變寬，小葉界限明顯，支氣管擴(kuò)張。血管內(nèi)形成血栓。胸膜變厚而粗糙，上有黃白色纖維蛋白附著，直至胸膜與肋膜、心包發(fā)生粘連。支氣管淋巴結(jié)和縱膈淋巴結(jié)腫大，切面多汁并有溢血點(diǎn)。心包積液，心肌松弛變軟。急性病例還可見(jiàn)肝、脾腫大，膽囊腫脹，腎腫大和被膜下小點(diǎn)溢血。

   （2）病理組織學(xué)變化。前驅(qū)期的病理變化主要表現(xiàn)為多發(fā)性支氣管肺炎，在鏡檢時(shí)可在肺炎灶與正常組織之間的間質(zhì)中見(jiàn)到炎性水腫和淋巴管炎引起的小葉間質(zhì)擴(kuò)張。肺炎灶中呼吸細(xì)支氣管上皮脫落，腔內(nèi)有多量滲出物，支氣管周?chē)姆闻輧?nèi)有滲出的漿液，嗜中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、紅細(xì)胞及脫落的肺泡上皮細(xì)胞、肺泡壁毛細(xì)血管充血。臨床明顯期的病理變化主要表現(xiàn)為纖維素性融合性肺炎和漿液纖維素性胸膜炎。在充血水腫期鏡檢可見(jiàn)肺泡壁毛細(xì)血管高度擴(kuò)張、充血，肺泡內(nèi)存有大量染成粉紅色的漿液，并有少量紅細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞及組織細(xì)胞等。在紅色肝變期鏡檢可見(jiàn)肺泡內(nèi)充滿(mǎn)大量纖維素，其中混有大量紅細(xì)胞和數(shù)量不等的嗜中性粒細(xì)胞、淋巴樣細(xì)胞和脫落的上皮細(xì)胞。肺泡壁的毛細(xì)血管高度擴(kuò)張、充血。灰色肝變期鏡檢，肺泡內(nèi)除可見(jiàn)有大量絲網(wǎng)狀纖維蛋白外，尚可見(jiàn)嗜中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞的數(shù)量顯著增多，肺泡壁毛細(xì)血管充血減弱，肺泡內(nèi)紅細(xì)胞數(shù)量大為減少。在發(fā)生壞死時(shí)，鏡檢可見(jiàn)細(xì)胞核破碎溶解、胞漿凝固，但壞死細(xì)胞和組織輪廓尚能辨認(rèn)。在肺間質(zhì)內(nèi)鏡檢可見(jiàn)小葉邊緣的壞死灶。當(dāng)血管壁壞死時(shí)可見(jiàn)血管壁變性、壞死及其周?chē)?rùn)細(xì)胞發(fā)生核崩解，血管內(nèi)有血栓形成。在間質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)壞死的同時(shí)或稍后，于血管周?chē)蛪乃啦课豢梢?jiàn)機(jī)化灶出現(xiàn)。鏡檢可見(jiàn)機(jī)化灶中心為一個(gè)或幾個(gè)大小不等的小血管，周?chē)鸀樾律娜庋拷M織，其中混有一定數(shù)量的白細(xì)胞，其外周為透明區(qū)，透明區(qū)外周為核破碎的壞死區(qū)。機(jī)化灶是該病特有的病理變化，在病理組織學(xué)上具有重要的診斷意義。在肺臟呈現(xiàn)上述病變的同時(shí)，一般還可以看到胸膜炎的變化。鏡檢可見(jiàn)漿膜表面附著有大量纖維素，其中混有一定數(shù)量的白細(xì)胞。漿膜下炎性水腫，淋巴管擴(kuò)張、淋巴栓形成，血管炎和血栓形成，膠原纖維呈纖維素樣壞死。

    2  血清學(xué)診斷

    常用的方法有瓊脂免疫擴(kuò)散試驗(yàn)、玻片凝集試驗(yàn)和熒光抗體試驗(yàn)等。直接免疫熒光試驗(yàn)操作方法如下。

   （1）材料準(zhǔn)備。器材有熒光顯微鏡、載玻片、蓋玻片、溫箱及滴管等，熒光抗體（FA）由指定單位供應(yīng)。

   （2）操作方法。熒光抗體效價(jià)測(cè)定。準(zhǔn)備8支小試管，第1管加 PBS 1.8mL，其余7管每管加PBS 1mL。向第1管加熒光抗體0.2mL，混合后從中取1mL加到第2管，以后由此類(lèi)推。得到1∶10~1∶1280不同對(duì)倍稀釋的熒光抗體。然后取長(zhǎng)好單個(gè)菌落的與抗血清相對(duì)應(yīng)的支原體瓊脂平皿培養(yǎng)物，加入約5mL的PBS，置室溫下半小時(shí)，吸棄PBS，再用鏟刀切取瓊脂培養(yǎng)物8塊，每塊約lcm2，分置于載玻片上。另準(zhǔn)備平皿，放入濕濾紙，將兩根玻棒平行放在濕濾紙上，再將有瓊脂塊的載玻片擱在玻棒上。然后將8個(gè)不同稀釋度的熒光抗體分別滴到8個(gè)瓊脂塊上，每塊1~2滴，并作稀釋度的標(biāo)記，蓋上平皿蓋。置室溫下半小時(shí)，取出平皿，用PBS輕洗瓊脂表面，用入射式光源顯微鏡找到菌落，再用汞燈觀察熒光。出現(xiàn)特異性熒光的最高稀釋度為該熒光抗體效價(jià)，使用時(shí)用2倍或4倍的效價(jià)。標(biāo)本片的制備。取長(zhǎng)好單個(gè)菌落的支原體瓊脂平皿培養(yǎng)物加入約5mL的PBS，置室溫下半小時(shí)，吸棄PBS，再用鏟刀切取瓊脂培養(yǎng)物，置于載玻片上。染色。將稀釋至工作濃度的FA，滴加在標(biāo)本面上，室溫恒濕染色，取PBS輕洗瓊脂表面數(shù)次，熒光顯微鏡下觀察。

   （3）結(jié)果判定。在熒光顯微鏡下檢查，被檢標(biāo)本的細(xì)菌結(jié)構(gòu)完整清晰，并在陽(yáng)性、陰性對(duì)照均成立時(shí)判定。在菌體中見(jiàn)到特異蘋(píng)果綠色熒光判定為陽(yáng)性；如果所有菌體中無(wú)特異性熒光，則判定為陰性。

   （靳連平  遼寧省綏中縣前衛(wèi)動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所）